马立克氏病防治技术规范

　　马立克氏病（Marek's  Disease，简称MD），是由疱疹病毒科α亚群马立克氏病病毒引起的，以危害淋巴系统和神经系统，引起外周神经、性腺、虹膜、各种内脏器官、肌肉和皮肤的单个或多个组织器官发生肿瘤为特征的禽类传染病。我国将其列为二类动物疫病。

　　为预防、控制和消灭马立克氏病，依据《中华人民共和国动物防疫法》和其它相关法律法规，制定本规范。

　　1  适用范围

　　本规范规定了马立克氏病的诊断技术、疫情报告、疫情处理和预防措施。

　　本规范适用于中华人民共和国境内的一切从事禽类饲养、经营和禽类产品生产、经营，以及从事动物防疫活动的单位和个人。

　　2  诊断

　　根据流行病学特点、临床症状、病理变化等可做出初步诊断，确诊须进行病原分离鉴定或血清学诊断。

　　2.1 流行病学

　　鸡是主要的自然宿主。鹌鹑、火鸡、雉鸡、乌鸡等也可发生自然感染。2周龄以内的雏鸡最易感。6周龄以上的鸡可出现临床症状，12～24周龄最为严重。

　　病鸡和带毒鸡是最主要的传染源。呼吸道是主要的感染途径，羽毛囊上皮细胞中成熟型病毒可随着羽毛和脱落皮屑散毒。病毒对外界抵抗力很强，在室温下传染性可保持4～8个月。

　　2.2  临床症状

　　本规范规定本病的潜伏期为4个月。

　　根据临床症状分为4个型，即神经型、内脏型、眼型和皮肤型。

　　神经型：最早症状为运动障碍。常见腿和翅膀完全或不完全麻痹，表现为“劈叉”式、翅膀下垂；嗉囊因麻痹而扩大。

　　内脏型：常表现极度沉郁，有时不表现任何症状而突然死亡。有的病鸡表现厌食、消瘦和昏迷，最后衰竭而死。

　　眼  型：视力减退或消失。虹膜失去正常色素，呈同心环状或斑点状。瞳孔边缘不整，严重阶段瞳孔只剩下一个针尖大小的孔。

　　皮肤型：全身皮肤毛囊肿大,以大腿外侧、翅膀、腹部尤为明显。

　　本病的病程一般为数周至数月。因感染的毒株、易感鸡品种（系）和日龄不同，死亡率表现为2%～70%。

　　2.3  病理剖检变化

　　神经型：常在翅神经丛、坐骨神经丛、坐骨神经、腰荐神经和颈部迷走神经等处发生病变，病变神经可比正常神经粗2～3倍，横纹消失，呈灰白色或淡黄色。有时可见神经淋巴瘤。

　　内脏型：在肝、脾、胰、睾丸、卵巢、肾、肺、腺胃和心脏等脏器出现广泛的结节性或弥漫性肿瘤。

　　眼  型：虹膜失去正常色素，呈同心环状或斑点状。瞳孔边缘不整，严重阶段瞳孔只剩下一个针尖大小的孔。

　　皮肤型：常见毛囊肿大，大小不等，融合在一起，形成淡白色结节，在拔除羽毛后尸体尤为明显。

　　2.4  实验室诊断

　　2.4.1  病原分离鉴定(见附件1)

　　2.4.2  病理组织学诊断

　　主要以淋巴母细胞、大、中、小淋巴细胞及巨嗜细胞的增生浸润为主，同时可见小淋巴细胞和浆细胞的浸润和雪旺氏细胞增生。

　　2.4.3  免疫学诊断

　　免疫琼脂扩散试验（见GB/T 18643）。

　　2.5  鉴别诊断

　　内脏型马立克氏病的病理变化易与禽白血病（LL）和网状内皮增生症（RE）相混淆，一般需要通过流行病学和病理组织学进行鉴别诊断。

　　2.5.1  与禽白血病（LL）的鉴别诊断

　　2.5.1.1  流行病学比较

　　禽白血病（LL）一般发生于16周龄以上的鸡，并多发生于24～40周龄之间；且发病率较低，一般不超过5％。MD的死亡高峰一般发生在10～20周龄之间，发病率较高。  

　　2.5.1.2  病理组织学变化

　　禽白血病（LL）肿瘤病理组织学变化主要表现为大小一致的淋巴母细胞增生浸润。MD肿瘤细胞主要表现为大小不一的淋巴细胞。

　　2.5.2  与网状内皮增生症（RE）的鉴别诊断

　　网状内皮增生症（RE）在不同鸡群感染率差异较大，一般发病率较低。其病理组织学特点是：肿瘤细胞多以未分化的大型细胞为主，肿瘤细胞细胞质较多、核淡染。有些病例也表现为大小不一的淋巴细胞。

　　现场常见MDV和REV共感染形成的混合型肿瘤，需做病原分离鉴定。

　　2.6  结果判定

　　2.6.1  临床诊断为疑似马立克氏病

　　符合流行病学2.1、临床症状2.2和剖检病变2.3的。

　　2.6.2  确诊

　　符合结果判定2.6.1，且符合实验室诊断2.4.1；或符合2.4.2和2.4.3的。

　　3  疫情报告

　　3.1  任何单位和个人发现患有本病或疑似本病的禽类，应立即向当地动物防疫监督机构报告。

　　3.2  当地动物防疫监督机构接到疫情报告后，按国家动物疫情报告管理的有关规定执行。

　　4  疫情处理

　　根据流行病学特点、临床症状、剖检病变，结合病原分离鉴定、组织病理学和免疫学检测做出的诊断结果可作为疫情处理的依据。

　　4.1  发现疑似马立克病疫情时，养殖户应立即将发病禽群隔离，并限制其移动。当地动物防疫监督机构要及时派员到现场进行调查核实，包括流行病学调查、临床症状检查、病理解剖、采集病料、实验室诊断等，根据诊断结果采取相应措施。

　　4.2  当疫情呈散发时,须对病禽及同群禽进行扑杀和无害化处理（按照GB 16548进行）。同时，对禽舍和周围环境进行消毒，对受威胁禽群进行观察。

　　4.3  当疫情呈暴发流行时按照以下要求处理

　　4.3.1  划定疫点、疫区、受威胁区

　　由所在地县级以上（含县级）兽医主管部门划定疫点、疫区、受威胁区。

　　疫点：指患病禽类所在的地点。一般是指患病禽类所在的禽场（户）或其它有关屠宰、经营单位；如为农村散养，应将自然村划为疫点。

　　疫区：指疫点外延3公里范围内区域。疫区划分时，应注意考虑当地的饲养环境和天然屏障（如河流、山脉等）。

　　受威胁区：指疫区外延5公里范围内的区域。

　　4.3.2  处置要求

　　在动物防疫监督机构的监督指导下，扑杀发病禽及同群禽，并对被扑杀禽和病死禽只进行无害化处理；对环境和设施进行消毒；对粪便及其它可能被污染的物品，按照GB 16548进行无害化处理；禁止疫区内易感动物移动、交易。

　　禽类尸体需要运送时，应使用防漏容器，并在动物防疫监督机构的监督下实施。

　　4.3.3  进行疫源分析和流行病学调查

　　4.3.4  处理记录

　　对处理疫情的全过程必须做好完整的详细记录，以备检查。

　　5  预防与控制

　　实行“以免疫为主”的综合性防治措施。

　　5.1  加强饲养管理，提高环境控制水平

　　饲养、生产、经营等场所必须符合《动物防疫条件审核管理办法》（农业部15号令）的要求，并须取得动物防疫合格证。

　　饲养场实行全进全出饲养方式，控制人员出入，严格执行清洁和消毒程序。

　　5.2  加强消毒管理，做好基础防疫工作

　　各饲养场、屠宰厂（场）、动物防疫监督检查站等要建立严格的卫生（消毒）管理制度。

　　5.3  免疫

　　应于雏鸡出壳24小时内进行免疫。所用疫苗必须是经国务院兽医主管部门批准使用的疫苗。

　　5.4  监测

　　养禽场应做好死亡鸡肿瘤发生情况的记录，并接受动物防疫监督机构监督。

　　5.5  引种检疫

　　国内异地引入种禽时，应经引入地动物防疫监督机构审核批准，并取得原产地动物防疫监督机构的免疫接种证明和检疫合格证明。

　　附件1

马立克氏病病原分离

　　1 用细胞作为MDV分离和诊断的材料

　　1.1 细胞来源

　　应来自病鸡全血(抗凝血)的白细胞层或刚死亡鸡脾脏细胞。

　　1.2 方法

　　1.2.1 将白细胞或脾脏细胞制成含有106～107个活细胞/ml的细胞悬液。

　　1.2.2 将0.5ml样品，分别接种2瓶（大小25 ㎝²）用SPF鸡胚制备的成纤维细胞。另取1瓶做空白对照。

　　1.2.3 将接种病料的和未接种病料的对照细胞培养瓶均置于含有5％CO2 的37.5°C的二氧化碳培养箱内。

　　1.2.4 每隔3天，换一次培养液。

　　1.2.5 观察有无细胞病变（CPE），即蚀斑，一般可在3～4天内出现。若没有，可按上述方法盲传1～2代。

　　2  用羽髓作为MDV分离和诊断的材料

　　这种方法所分离的病毒为非细胞性的，但不常用。

　　2.1 取长约5mm的羽髓或含有皮肤组织的羽髓，放入SPGA－EDTA缓冲液〔0.2180M蔗糖（7.462g）；0.0038M磷酸二氢钾（0.052g）；0.0072M磷酸二氢钠（0.125g）；0.0049ML－谷氨酰胺（0.083g）、1.0％血清白蛋白（1 g）和0.2％乙二胺四乙酸钠（0.2g），蒸馏水100ml，过滤除菌，调节pH值到6.3〕中。

　　2.2 病毒的分离与滴定方法

　　上述悬浮液经超声波处理，通过0.45μm微孔滤膜过滤后，接种于培养24小时的鸡肾细胞上，吸附40分钟后加入培养液，并按上述方法培养7 天。

　　3  上述方法可以用于1型和2型MDV的分离

　　所分离的病毒如果是免疫禽群，也可以分离到疫苗毒。

　　有经验的工作人员可根据蚀斑出现的时间、发展速度和形态，即可对各型病毒引起的蚀斑作出准确鉴别。HVT蚀斑出现较早，而且比1型的要大，而2型的蚀斑出现晚，比1型的小。

　　附件2

消    毒

　　1  消毒前的准备

　　1.1  消毒前必须清除有机物、污物、粪便、饲料、垫料等；

　　1.2  必须选用对马立克氏病病毒有效的消毒药品，如烧碱、醛类、氧化剂类、酚制剂类、氯制剂类、双季胺盐类等。

　　1.3  备有喷雾器、火焰喷射枪、消毒车辆、消毒防护用具（如口罩、手套、防护靴等）、消毒容器等。

　　1.4  注意消毒剂不可混用.

　　2  消毒范围

　　禽舍地面及内外墙壁，舍外环境；饲养、饮水等用具，运输等设施设备以及其它一切可能被污染的场所和设施设备。

　　3  消毒方法

　　3.1  金属设施设备的消毒，可采取火焰、熏蒸等方法消毒；

　　3.2  圈舍、场地、车辆等，可采用消毒液清洗、喷洒等方法消毒；

　　3.3  养禽场的饲料、垫料等，可采取深埋发酵处理或焚烧处理等方法消毒；

　　3.4  粪便等可采取堆积密封发酵或焚烧处理等方法消毒；

　　3.5  饲养、管理等人员可采取淋浴等方法消毒；

　　3.6  衣帽鞋等可能被污染的物品，可采取浸泡、高压灭菌等方法消毒；

　　3.7  疫区范围内办公、饲养人员的宿舍、公共食堂等场所，可采用喷洒的方法消毒；

　　3.8  屠宰加工、贮藏等场所以及区域内池塘等水域的消毒可采取相应的方法进行，并避免造成有害物质的污染。